常用的液相色譜儀檢測器有哪幾種?
2019-06-19
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液相色譜法(HPLC)是目前應用廣泛的分離、分析、純化有機化合物(包括能通過化學反應轉變為有機化合物的無機物)的有效方法之一。在已知的有機化合物中,約有80%能用液相色譜法分離、分析,而且由于此法條件溫和,不破壞樣品,因此液相色譜儀特別適合高沸點、難氣化揮發、熱穩定性差的有機化合物和生命物質。對于液相色譜儀,檢測器是*的搭檔,在檢測各種元素物質時,需要檢測器幫助將柱流出物中樣品組成和含量的變化轉化為可供檢測的信號,那么液相色譜儀常用檢測器的種類有哪些,下面我們來仔細了解一下。
一、通用型液相色譜儀檢測器
1、示差折光檢測器(RID)
示差折光檢測器是一種通用型檢測器,只要被測組分與洗脫液的折光指數有差別就可使用。生命科學中常遇到各類糖類化合物,沒有紫外吸收,一般常用示差折光檢測器。它的通用性比UVD廣,但靈敏度要低,對溫度變化敏感,并與梯度洗脫不相容,因而限制了它的使用。
2、質譜檢測器(MSD)
質譜檢測器是另一種通用型檢測器,在靈敏度、選擇性、通用性及化合物的分子量和結構信息的提供等方面都有突出的優點。但它的昂貴操作費用和復雜性限制了它的推廣應用。
3、蒸發光散射檢測器(ELSD)
蒸發光散射檢測器也是一種通用型的檢測器,可檢測揮發性低于流動相的任何樣品,而不需要樣品含有發色基團。ELSD的響應值與樣品的質量成正比,因而能用于測定樣品的純度或者檢測未知物。ELSD靈敏度比RID高,對溫度變化不敏感,基線穩定,可用于梯度洗脫。現在ELSD已被廣泛應用于碳水化合物、類脂、脂肪酸和氨基酸、藥物以及聚合物等的檢測。
二、常用液相色譜儀檢測器
1、二極管陣列檢測器(PDAD)
二極管陣列檢測器是20世紀80年代才出現的一種光學多通道檢測器,它可以看作是UVD的一個分支。在對每個洗脫組分進行光譜掃描,經計算機處理后,得到光譜和色譜結合的三維圖譜。其中吸收光譜用于定性(確證是否是單一純物質),色譜用于定量,常用于復雜樣品(如生物樣品、中草藥)的定性定量分析。
2、熒光檢測器(FLD)
熒光檢測器同樣屬于選擇性檢測器,其靈敏度在目前常用的HPLC檢測器中是zui高的,應用也較多,僅次于UVD。它適用于能激發熒光的化合物。很多與生命科學有關的物質,如氨基酸、胺類、維生素、甾族化合物及某些代謝藥物都可以用熒光法檢測。熒光檢測器在生物樣品痕量分析中很有用,尤其在用熒光衍生后,可以檢測很微量的氨基酸和肽。
3、紫外吸收檢測器(UVD)
紫外吸收檢測器是目前HPLC中應用zui廣泛的檢測器。它的主要特點是靈敏度高,線性范圍寬,對流速和溫度變化不敏感,可用于梯度洗脫。它要求被檢測樣品組分有紫外吸收,屬于選擇性檢測器。
4、化學發光檢測器
化學發光檢測器是近年來發展起來的一種快速、靈敏的新型檢測器,因其設備簡單、價廉、線性范圍寬等優點。其原理是基于某些物質在常溫下進行化學反應,生成處于激發態勢反應中間體或反應產物,當它們從激發態返回基態時,就發射出光子。由于物質激發態的能量是來自化學反應,故叫作化學發光。當分離組分從色譜柱中洗脫出來后,立即與適當的化學發光試劑混合,引起化學反應,導致發光物質產生輻射,其光強度與該物質的濃度成正比。
通用型檢測器可連續測量色譜柱的流出物的全部特性變化,通常采用差分測量法,這類檢測器包括示差折光檢測器、介電常數檢測器、電導檢測器等,通用檢測器適用范圍廣,但由于對流動相有響應,因此易受溫度變化、流動相和組分的變化的影響,噪聲和漂移都比較大,靈敏度較低,不能用梯度洗脫。
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